Родился в Серпухове около 1495 года. С 1512 по 1515 год находился в плену у татар, где изучил татарский язык и ознакомился с мусульманством. Принял монашество в Московской СпасоАндрониевой обители. Был игуменом Николаевского Пешношского монастыря Московской епархии. Строитель Спасо-Преображенского монастыря в г. Казани.
В 1567 году святитель Филипп, Митрополит Московский, возглавил его хиротонию во епископа Тверского. Святитель Варсонофий пребывал на покое в Спасо-Преображенском монастыре в г. Казани, где и скончался 11 апреля 1576 года. Обретение мощей святителей Варсонофия, епископа Тверского, и Гурия, архиепископа Казанского, совершилось 4 октября 1595 года.
